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要在一间通风系统正常运行的条件下实现负压环境，调节手术室净化工程的空气流动供应量与排放量，实现排放量比供应量高10%或者高50立方英尺/分钟(取决于较高值)即可。大多数情况下，这种标准就能够实现至少0.001英寸水位表的负压值。如果无法实现0.001英寸水位表的负压值，也不能通过增加流量差额(在通风系统允许范围内)实现，则应仔细检查该手术室净化工程是否存在缝隙(例如门缝、窗缝、水管装置和各种嵌入墙壁的装置等)，然后采取补救措施，密封这些裂缝。
手术室净化工程要产生负压状态，可通过平衡手术室净化房间的通风系统，让自动排放的空气多于自动提供的空气即可实现。这样就造成通风不平衡，手术室净化房间通风系统不断从手术室净化工程外面吸进空气补充。在一间经过精心设计的负压室里，空气完全通过门下面的一个缝隙(一般大约半英寸高)流入。除该缝隙外，这间手术室净化工程的负压室应该尽可能密封，以防止空气通过各种其它裂缝和缝隙进入，例如窗户四周的各种缝隙，墙上照明设备以及插座等。即使手术室净化车间已经实现了负压条件，这些地方漏进的空气仍可能抵消或者消除手术室净化车间的负压状态。
手术室净化工程内的负压值可通过改变通风系统运行或者打开和关闭手术室净化车间的门、走廊门或者窗户而改变。如果已经建立起一种运行结构，应确保妥善关闭负压室以及其它区域(例如影响空气压力的走廊门)的所有门窗，人员需要进入或离开手术室净化工程或区域情况除外。
实现和维持手术室净化工程负压以便空气流进手术室所需的小压力差非常小(水位表的0.001英寸)。实际实现负压值取决于通风系统空气消耗量与供应量的差额及手术室净化工程的结构和大小，包括手术室净化车间中的空气流动路径和流动开口。如果手术室净化车间密封情况良好，则很容易实现0.001英寸水位表的负压值。但如果手术室净化工程密封情况不佳，正如很多卫生机构的实际情况(特别是较旧的医疗机构)，要实现较大的负压值可能需要排放量/供应量差值大于通风系统容量。
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