大庆标书制作公司标书制作加急出稿

材料准备
1)应根据施工进度计划及时编制出所需的材料计划，以利及时供料。
2)做好自供材料的订货采购，进行市场调查，货比三家，选用合格产品。
3)本工程的周转材料一次性投入，确保工程进度。
（三）劳动力准备
本工程施工前须做好各类劳动力的组织、调配工作，确保劳动力的需要，使工程不至于因劳动力不足而停滞、脱节、影响工程施工，同时对劳动力实行动态管理，劳动力随施工进度和工程量大小有组织地调配进场，充分发挥自身队伍的技术和管理优势。

实验手段、关键技术等说明）；
【研究方案】
分为预初实验和正式实验两个阶段
阶段：预初实验阶段
1、体内实验
动物分组：
：用百草枯造模，根据补阳还五汤给药剂量的不同将90只大鼠随即分为三组，每组30只。三种药物剂量分别为：0.4mg/kg、0.6mg/kg和0.8mg/kg，造模当日开始给药直至处死。然后：每组再根据观察持续时间的不同分为三个亚组，每组10只。分别观察至28、56和112天。
观察指标：
1）动物存活率
2）动物血标本：检测各组动物血常规、肝、肾功能变化
3）动物肺组织病理标本：HE染色，光镜下观察组织结构、细胞形态等变化，以评价药物对肺组织的影响。
2、体外实验：
取动物肺组织，分离和培养肺泡巨噬细胞和成纤维细胞，采用 HE 染色法观察肺组织肺泡炎程度，RT-PCR技术观察肺组织病理及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA，Smad3mRNA 的表达。观察不同浓度的补阳还五汤对肺组织的影响差异，同时观察补阳还五汤的体外细胞毒性作用。
3、分析决策：
综合分析体内、体外研究结果，选择动物存活率高，肺组织病理变化轻，毒性反应轻的剂量为佳给药剂量。

关于细胞凋亡的检测：主要问题是细胞凋亡判断标准和定量分析。前述任何一个指标单使用，均不能准确的反映细胞凋亡的真实情况，将几种方法结合运用则可相互取长补短，较为的定性、定量。因此，本研究采取多种方法联合应用，从不同角度证明细胞凋亡事件是否发生、发生的时期和严重程度。如：（1）检测细胞水平和亚细胞水平的形态学变化：用光镜可观察到细胞变小，胞质浓缩，核染色质浓缩并边缘化，核片段形成和凋亡小体形成；用电镜可观察超微结构的变化，如胞膜微绒毛变少和消失等。（2）根据生化指标变化：如 DNA 片段化的形成，应用原位缺口翻译技术（TUNEL）进行定性和定量检测。在定量分析时，DNA断裂点形成是目前常用的判断标准，TUNEL是凋亡检测，特别是定量分析中主要的方法。（3）利用分子生物学指标：主要指凋亡相关基因及其表达产物的检测。本研究选择多个促凋亡基因和抗凋亡基因同时检测，提高准确性；选择反映不同凋亡时期的新检测指标，更地帮助判断凋亡事件发生的早晚。（4）利用流式细胞术：流式细胞术是研究程序性细胞死亡时细胞许多特性的一种重要的定性、定量分析技术。当细胞凋亡时，细胞膜的通透性增加，小分子 DNA片段丢失，用 DNA特异性荧光染料进行染色后，凋亡细胞的染色程度下降，通过流式细胞仪进行 DNA 含量的检测，可以鉴定出凋亡的细胞。利用流式细胞术结合新的研究方法，还可分辨出早期凋亡和晚期凋亡的细胞，如进行 BALF中凋亡细胞磷脂酰丝氨酸外翻分析和凋亡细胞线粒体膜势能的检测等。技术关键在于：需保持检测标本呈单细胞悬液状态，不至于凝聚成团；活细胞与死细胞的鉴别以及早期凋亡和晚期凋亡细胞的鉴别，都需要不同的检测方法和